Enrico Brignano nasce a Roma e cresce artisticamente attraverso l'Accademia per giovani comici creata da Gigi Proietti. Partecipa come comico e barzellettiere alla prima edizione del programma La sai l'ultima?, in onda su Canale 5.
Nel 1998 e nel 2000 è Giacinto in Un medico in famiglia.
Nel 2000 gira il suo primo film da regista e protagonista Si fa presto a dire amore al fianco di Vittoria Belvedere. Inizia l'ascesa nel mondo dello spettacolo grazie alle tournée estive di teatro e cabaret e nel 2001 Carlo Vanzina lo sceglie per il ruolo di Francesco nel fim South Kensington.
Interrompe la carriera cinematografica per dedicarsi maggiormente alla sua vera passione, il teatro, e così scrive e interpreta diversi spettacoli tra i quali: Io per voi un libro aperto, Mai dire mouse, Non sia mai viene qualcuno, Evviva e Brignano con la O. Torna nuovamente sul grande schermo al fianco di Vincenzo Salemme e Giorgio Panariello con il film SMS - Sotto Mentite Spoglie, con i quali girerà altri film negli anni successivi.
Nel 2007 conduce un quiz su Rai 2, Pyramid. Nello stesso anno fa parte del cast di Zelig che lo ha definitivamente consacrato come uno dei migliori comici italiani degli ultimi anni.
Nel 2010 interpreta a teatro il ruolo di Rugantino, e nel 2011 conduce Le Iene insieme a Luca Argentero e Ilary Blasi.
È inoltre autore di dicersi libri, tra i quali: Sono romano ma non è colpa mia. Dimmi se ci fai e ti dirò chi sei (Rizzoli), Tutto suo padre (Rizzoli 2012), Il meglio d'Italia. Sai qual è? Se lo sai dillo anche a me (Rizzoli 2014), Ci siamo evoluti bene e ce ne evoleremo ancora (Rizzoli 2015) e Nessun dorma... tranne lei (Rizzoli 2017).